黄金城集团

通用问题

重组蛋白质相关

  • 1. 贵公司提供哪些类型的重组蛋白?以何种格式提供?

    GenScript提供的大多数重组蛋白是细胞因子、生长因子和趋化因子。黄金城集团还在不断扩大重组蛋白的范围,包括神经营养素、病毒抗原和酶。GenScript提供的重组蛋白均为无菌、冻干、无载体的分装形式,并配有相应的缓冲液。黄金城集团的重组蛋白不添加任何额外的蛋白质或防腐剂。

  • 2. 如何生产重组蛋白?真核表达(酵母、昆虫和哺乳动物细胞)与大肠杆菌表达相比有什么优势?

    黄金城集团的大多数重组蛋白都是在真核系统中生产的,分析证书中会为您提供有关单个产品如何生产的具体信息。真核生物作为表达系统有几个优势。

    • 真核生物本身很少分泌原生蛋白,但却能分泌重组蛋白。因此,真核生物系统通常是分泌表达重组蛋白然后进行纯化。在大肠杆菌中制造的重组蛋白通常被定位在包涵体中。从包涵体中纯化重组蛋白需要在苛刻的条件下进行,然后再进行重折叠处理。这些苛刻的处理会对蛋白质的功能产生负面影响。
    • 真核生物分泌的重组蛋白由高尔基体处理,因此可以进行翻译后修饰。这些修饰包括糖基化、磷酸化和硫酸化。有许多蛋白质需要经过修饰才能发挥功能、正常折叠或溶解。
    • 真核生物没有像大肠杆菌那样的细菌细胞壁,因此不存在可影响目标系统炎症反应的内毒素(脂多糖)。
  • 3. 当我打开小瓶时,什么也没看到。我怎么知道小瓶里有蛋白质?

    打开小瓶之前要先离心!黄金城集团的大多数产品都是用低浓度缓冲液冻干的,因此几微克的产品可能不太明显。黄金城集团建议在打开前将小瓶放入微型离心机中离心 20-30秒,以将可能滞留在瓶盖或试管侧面的蛋白质离心到小瓶底部。黄金城集团的质量控制程序可确保每小瓶中的产品量正确无误。

  • 4. 如何复溶冻干粉?重组蛋白复溶可接受的体积是多少?重组蛋白复溶后的浓度是多少?

    请查阅您的货物中包含的COA,以了解复溶方法,因为并非所有产品都在相同的条件下进行复溶。一般来说,黄金城集团建议使用无菌水进行复溶。将推荐体积的无菌水加入小瓶中,轻轻摇动以完全溶解蛋白质。不要涡旋。

    重组蛋白的浓度取决于复溶体积。例如,如果在100µL载体蛋白溶液中复溶10µg重组蛋白,则浓度为10µg/100µL或100µg/mL。

  • 5. 如何储存重组蛋白?重组蛋白的保质期多长?

    若要长期保存,蛋白溶液应与载体蛋白(如0.1% BSA或0.1% HSA)一起以等分的形式保存,并在-20°C下冷冻保存。请注意,每次冷冻/解冻循环都可能导致蛋白质发生变性。除非COA上另有说明,大多数重组蛋白的保质期为一年。请按照COA上的规定在最佳储存条件下保存。

  • 6. 什么是载体蛋白?

    载体蛋白(如HSA或BSA)用于提高重组蛋白的稳定性,避免产品粘附在瓶壁上。

  • 7. 如何确定重组蛋白的量?为什么我的检测结果与你们的结果不同?

    黄金城集团通过BCA、SDS-PAGE、HPLC和其他方法确定重组蛋白的量。不同的检测方法会产生不同的定量结果。如果您采用不同的检测方法,有时差异会很大。蛋白质在储存过程中也有可能形成聚集体,从而在复溶和离心后造成损失。

  • 8. 为什么有些蛋白质融合了标签?蛋白质标签会影响蛋白质活性吗?

    黄金城集团大多数重组蛋白产品都是无标签的, 不过蛋白的标签可用于多种不同的应用。

    • 蛋白标签可用于蛋白质纯化。
    • 当没有特定抗体时,标签用于蛋白质印迹或 ELISA 中的蛋白质检测。
    • Fc标签可稳定分子,可能会延长连接产物的半衰期。 由于Fc片段倾向于二聚化,因此它有助于将连接的蛋白(特别是受体)形成具有生物活性的二聚体。

蛋白质标签可能会也可能不会影响蛋白质的活性。在某些应用中,小标签(如 His-tag)可能不会影响蛋白质的活性,因此无需去除。例如,中有100多种His标签蛋白的结构。这表明,小的His标记通常不会干扰蛋白质的正确折叠。此外,黄金城集团的蛋白质网页上还列出了测试的活性结果。如果您担心标签会干扰蛋白质活性,而网上又没有活性数据,请随时通过product@nrapc.com与黄金城集团联系,获取最新信息。

酶活和实验设计

  • 1. 重组蛋白的比活性是多少?什么是蛋白质活性的单位“unit"?

    每种重组蛋白的生物活性(ED50)(或 “unit")。ED50定义为活性为最大反应的50%的蛋白质浓度,单位为ng/ml。这种表示活性的方法只适用于剂量-反应曲线呈正余弦形的蛋白质。将ED50转换为比活度的公式为:

    Units/mg=1×104/ED50 (ng/ml)

    请注意,GenScript不使用WHO(美国国家生物标准与控制研究所)提供的国际标准来测量重组蛋白的活性。这些"国际单位"与ED50之间无法进行转换。比较不同来源重组蛋白活性的最佳方法是使用同一系统并排进行相同的生物测定。

  • 2. 贵公司重组蛋白的活性与竞争对手的相比如何?你们是否通过体内试验检测重组蛋白的生物活性?

    黄金城集团对每一批重组蛋白都进行质量控制。黄金城集团不仅检测其生物活性,还将其与其它市售重组蛋白进行比较。黄金城集团确保每种重组蛋白的活性至少与竞争产品相当或更好。为了向您提供最好的产品,黄金城集团有严格的QC体系。黄金城集团通常通过说明书中描述的体外检测来验证蛋白质的活性,而不是进行体内测试。

  • 3. 不同批次的重组蛋白的比活性是否不同?

    每个批次和检测实验类型的比活性都是独一无二的。黄金城集团建议您进行自己的比酶活实验验证,以找出您的系统的最佳ED50。

  • 4. 我想尝试用你们的蛋白质做一个实验,但你们用于确定活性的生物测定方法与我的应用不一样。你们的蛋白质能适用于我的应用吗?

    黄金城集团产品的用途多种多样,因此黄金城集团不可能预测每一种可能的应用。黄金城集团的标准生物测定用于确认产品的公认活性水平。黄金城集团的蛋白质可在广泛的浓度范围内用于许多不同的应用,因此,最终用户有责任确定最适合其特定检测的浓度。

  • 5. 我可以在ELISA中使用不同公司的重组蛋白吗?

    您可以在ELISA中使用不同公司的重组蛋白,但请注意以下几点:

    • 蛋白质标签有助于蛋白质纯化。
    • 由同一来源的大肠杆菌表达的重组蛋白,不同批次之间的免疫反应性可能相差10倍以上,这主要是由于重折叠的不一致性造成的。
    • 不同的试剂盒标准品可根据不同的参照物进行生产和校准。迄今为止,重组蛋白免疫活性还没有公认的标准。
    • 试剂(标准品、抗体、匹配基质)和方案的任何改变都可能影响最终的检测性能。
  • 6. 大多数蛋白质是否具有跨物种活性?

    不能一概而论,必须对每种产品进行单独的物种交叉反应研究。许多人源细胞因子会在小鼠细胞系中产生良好的反应,许多小鼠蛋白也会在人细胞上显示出活性。其他一些蛋白质用于不同的物种时,活性可能较低。

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