产品特点

覆盖多种AAV血清型滴度检测

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黄金城集团L01035可检测包括但不限于：AAV1/2/5/6/8/9等血清型。

试剂盒原料自产

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抗体原料/标准品可确保高纯度、高特异性、一致性和高稳定性。

试剂盒性能佳

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线性范围宽/精密度高/准确度高。

极短检测时间

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检测时长约2.5小时。

产品列表

检测原理

• AAV滴度衣壳蛋白ELISA试剂盒

  黄金城集团AAV滴度衣壳蛋白ELISA试剂盒均是利用了两种抗AAV衣壳蛋白的单克隆抗体，它们可与衣壳蛋白的不同表位结合。当标准品或样品加入捕获板时，AAV衣壳蛋白可以被包被在捕获板上的捕获抗体捕获，之后在体系中加入与生物素偶联的检测抗体，该检测抗体可以与捕获板上结合的衣壳蛋白相互作用。随后添加可与生物素偶联的检测抗体相互作用的Streptavidin-HRP，经洗涤加入TMB和终止溶液，最后使用酶标仪读取OD450 nm。测试样品中衣壳蛋白的浓度可根据衣壳蛋白标准曲线实现精确定量。

  

  图1：AAV滴度衣壳蛋白ELISA试剂盒检测原理

验证数据

• 稀释线性

  表1a：AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes
  （GenScript, L01035）稀释线性验证

  Sample No.	Dilution Factor	Measured Conc. (Capsids/mL)	CV
  Sample A	36	2.11E+11	3%
  	72	2.18E+11
  	144	2.10E+11
  	288	2.26E+11
  Sample B	60	2.29E+11	8%
  	120	2.55E+11
  	240	2.74E+11
  	480	2.73E+11
  Sample C	50	1.10E+11	9%
  	100	1.31E+11
  	200	1.33E+11
  	400	1.19E+11
  Sample D	60	1.03E+11	9%
  	120	1.12E+11
  	240	9.39E+10
  	480	5.99E+10
  Sample E	50	9.78E+10	3%
  	100	1.03E+11
  	200	9.87E+10
  	400	5.94E+10

  表1b：AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）
  稀释线性验证

  Sample No.	Dilution Factor	Measured Conc. (Capsids/mL)	CV
  Sample 1	120	1.26E+11	6%
  	240	1.31E+11
  	480	1.20E+11
  	960	1.39E+11
  Sample 2	130	1.37E+11	4%
  	260	1.38E+11
  	520	1.28E+11
  	1040	1.41E+11
  Sample 3	110	1.02E+11	8%
  	220	1.08E+11
  	440	1.03E+11
  	880	1.20E+11
  Sample 4	130	2.70E+11	5%
  	260	2.76E+11
  	520	2.65E+11
  	1040	2.98E+11
  Sample 5	80	2.00E+11	5%
  	160	2.19E+11
  	320	2.20E+11
  	640	2.24E+11

  对样本进行不同倍数的稀释，使用AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（GenScript, L01035），AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）分析稀释线性，结果显示同一样本，不同的稀释倍数回算的样本浓度CV＜10%，稀释误差以及受样本基质影响小。

• 精密度

  表2a：AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes 重复性评估

  Batch No.	Repeats	Average Measured Conc. (Capsids/mL)	% CV	Theoretical Conc. (Capsids/mL)	Recovery Rate
  #1	10	4.03E+08	4%	4.00E+08	101%
  	10	1.24E+09	3%	1.20E+09	103%
  	10	4.70E+09	2%	5.00E+09	94%
  #2	10	4.32E+08	4%	4.00E+08	108%
  	10	1.28E+09	6%	1.20E+09	107%
  	10	4.58E+09	6%	5.00E+09	92%
  #3	10	3.94E+08	6%	4.00E+08	99%
  	10	1.24E+09	8%	1.20E+09	103%
  	10	4.50E+09	6%	5.00E+09	90%

  表2b：AAV2 Titer Capsid ELISA Kit 重复性评估

  Batch No.	Repeats	Average Measured Conc. (Capsids/mL)	% CV	Theoretical Conc. (Capsids/mL)	Recovery Rate
  #1	10	1.92E+08	6%	1.80E+08	107%
  	10	4.98E+08	7%	5.00E+08	100%
  	10	1.95E+09	2%	2.00E+09	98%
  #2	10	1.83E+08	5%	1.80E+08	102%
  	10	4.85E+08	4%	5.00E+08	97%
  	10	1.95E+09	6%	2.00E+09	98%
  #3	10	1.79E+08	6%	1.80E+08	99%
  	10	4.69E+08	5%	5.00E+08	94%
  	10	1.94E+09	6%	2.00E+09	97%

  表3a：AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes 三批次批间差评估

  Batch Amount	Repeats	Average Measured Conc. (Capsids/mL)	% CV	Theoretical Conc. (Capsids/mL)	Recovery Rate
  3	3×10	4.09E+08	6%	4.00E+08	102%
  	3×10	1.26E+09	6%	1.20E+09	105%
  	3×10	4.59E+09	5%	5.00E+09	92%

  表3b：AAV2 Titer Capsid ELISA Kit 三批次批间差评估

  Batch Amount	Repeats	Average Measured Conc. (Capsids/mL)	% CV	Theoretical Conc. (Capsids/mL)	Recovery Rate
  3	3×10	1.47E+08	9%	1.80E+08	82%
  	3×10	4.83E+08	5%	5.00E+08	97%
  	3×10	1.88E+09	6%	2.00E+09	94%

  使用三批次试剂盒分别对3个浓度水平的样本进行测试，每个样本各重复检测10次。以此分析AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（GenScript, L01035）和AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）的批内精密度和批间精密度。结果显示，L01035和L00942的精密度CV<10%。

• 回收率

  表4a：AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（GenScript, L01035）添加回收验证

  Spiked Conc. (Capsids/mL)	Batch No.	Recovery Rate
  1.50E+08	#1	98%
  	#2	109%
  	#3	94%

  表4b：AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）
  添加回收验证

  Spiked Conc. (Capsids/mL)	Batch No.	Recovery Rate
  2.00E+08	#1	100%
  	#2	103%
  	#3	93%

  使用三批次试剂盒分别对加标分析物进行测试，以此分析AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（GenScript, L01035）和AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）的添加回收率。结果显示，L01035和L00942的回收率均在80%-120%范围内。

• L01035和L00942检测相关性
  

  图2： 使用AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（货号：L01035）通用型检测试剂盒与AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（货号：L00942）单血清型检测试剂盒，检测6例相同的AAV2样本，相关性R²=0.9971。

• AAV2.7m8 样本检测案例
  

  图3： 黄金城集团的AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（GenScript, L01035）以及AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）均可以对改造的AAV2.7m8进行检测。

• L01035 对不同血清型的检测范围

  表5：不同 AAV 血清型滴度测定的典型测定工作范围

  Serotype	Typical assay working ranges (Capsids/mL)
  AAV1	2.73E+07 - 1.75E+09
  AAV2	1.32E+08 - 7.00E+09
  AAV5	6.30E+07 - 4.00E+09
  AAV6	3.91E+07 - 2.50E+09
  AAV8	6.27E+07 - 4.00E+09
  AAV9	1.09E+08 - 7.00E+09

  *表中各血清型工作范围验证选择的材料，AAV2为黄金城集团自产的VLP（Virus-like particle），其余均为来自于Progen的Empty capsids。

  

  图4： 不同AAV血清型滴度测定标准曲线的叠加图
  AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（货号：L01035）中的抗体原料对不同血清型的 AAV 的识别情况不同，因此在检测不同血清型时，检测工作范围会有所不同。

• L00942 的检测特异性
  

  图5： 使用AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）检测AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV8、AAV9样本，能够仅特异性检测AAV2样本，且不与其他测试样本产生交叉反应。

常见问题解答

• 1. 试剂盒中是否提供阳性标准品？

  AAV2 Titer Capsid ELISA Kit（GenScript, L00942）提供AAV2标准品，该标准品为黄金城集团自产的VLP（Virus-like particle）。
  AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes（货号：L01035）仅提供AAV2标准品，不提供其他血清型的标准品。其他血清型的标准品需要用户自行建立。

• 2. 如果没有其他血清型的AAV阳性标准品，是否可以使用AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes？

  建议使用与样品中 AAV 衣壳相匹配的阳性标准品，以生成准确的定量标准曲线。
  若用户无法获取AAV其他血清型标准品，推荐使用下方换算公式，即使用本试剂盒中的AAV2标准品建立标准曲线并测定样本的浓度，再将测定浓度作为X带入公式计算出对应血清型的滴度。表格中的公式已进行相关性验证（该方法仅限粗略计算）。

  Serotype	Typical assay working ranges (Capsids/mL)
  AAV1	y = 0.2498x - 3E+07
  AAV5	y = 0.8306x - 2E+07
  AAV6	y = 0.3759x - 3E+07
  AAV8	y = 0.5314x - 4E+06
  AAV9	y = 0.4569x + 9E+07

• 3. AAVX Titer Capsid ELISA Kit - Multiple Serotypes对不同AAV血清型的检测范围。

  本试剂盒已验证对于AAV 血清型 1、2、5、6、8、9的适用性，典型的工作范围可见下表：

  Serotype	Typical assay working ranges (Capsids/mL)
  AAV1	2.73E+07 - 1.75E+09
  AAV2	1.32E+08 - 7.00E+09
  AAV5	6.30E+07 - 4.00E+09
  AAV6	3.91E+07 - 2.50E+09
  AAV8	6.27E+07 - 4.00E+09
  AAV9	1.09E+08 - 7.00E+09

  *表中各血清型工作范围验证选择的材料，AAV2为黄金城集团自产的VLP（Virus-like particle），其余均为来自于Progen的Empty capsids。

  本试剂盒中的抗体原料还可识别AAV2.7m8，AAVDJ 和 AAVrh.1，但本试剂盒未对这三种血清型进行验证。对于其他的 AAV 血清型，本试剂盒未进行验证，但并不一定意味着它们无法被检测到。用户可以按照该试剂盒的方案来评估本品对其他血清型的适用性。

• 4. 一个试剂盒可以检测多少个样本？

  试剂盒中各配有一块预包被的96孔酶标板，其中包含8 孔 x 12 板条，黄金城集团建议按照说明书中推荐的标准曲线稀释梯度，配置8个标准品工作液。 为了确保滴度的可靠定量，建议标准品和样品均一式两份进行重复测试。由此可计算出，一旦应用了标准曲线，就可以得到40个重复的测量值。

• 5. 是否可以提供额外的洗液试剂？

  可单独选购 20× Wash Solution (GenScript, B00063)，该洗液适用于本试剂盒。

• 6. 测值超出线性范围是否有效？

  无效。需要调整稀释倍数重新复测。

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