结果:基因敲入效率效率提升高达 30% (较之常规质粒)
- CRISPR基因敲入(敲入2.5 kb 片段)
- 转座子基因敲入(敲入4.8 kb 片段)
无抗性标记与细菌源序列的载体,骨架<430bp
更安全高效的基因敲入模板、病毒包装质粒、非病毒载体
常规用于目的基因递送的质粒,载体骨架序列一般>1.5 kb,且通常含有抗生素抗性基因。抗性基因虽然方便了细菌的筛选与培养,但在基因与细胞治疗等领域,抗性基因残留存在带入体内的风险,导致耐药性上的安全隐患。同时,载体骨架小,则具有毒性更低、免疫原性更低、表达更稳定、转染效率高的优势,进而提升RNA转录水平、蛋白表达水平。
因此,黄金城集团开发了GenCircle dsDNA,一种无抗性标记小型环状双链DNA载体合成服务,质粒骨架仅400bp+,去除抗性基因、细菌源序列、 宿主菌株外不会复制。黄金城集团可定制合成包含您目的基因的GenCircle dsDNA,提升基因与细胞治疗研究的安全性与效率。
服务名称 | 级别 | 目的基因长度* | 交付量* | 交付形式 | 周期 # | 应用领域 |
---|---|---|---|---|---|---|
GenCircle dsDNA |
HighPure级别 | 1-20kb | 100 μg - g |
冻干粉 / 液体 (缓冲液可选) |
11天起 |
|
UltraPure级别 | 1 mg - g |
|
# 客户可以选择:1. 在黄金城集团合成基因后构建GenCircle dsDNA;2. 客户自己提供已经合成好的含目的基因的质粒直接构建GenCircle dsDNA。
* 8kb以上详询技术支持,其他目的基因长度和交付量欢迎详询,邮件发送至oligo@nrapc.com或拨打电话400-025-8686转5812或5815,专业技术支持为您服务。
# 此周期不含基因合成周期。
QC项目 | 标准 | HighPure级别 | UltraPure级别 |
---|---|---|---|
分光光度计 | 交付量保证 | ||
Sanger测序 | 100%序列正确 | ||
A260/280 | 1.8-2.0 | ||
限制性酶切分析 | 酶切后凝胶电泳分析与预期大小一致 | ||
宿主RNA残留AGE分析 | 条带不被检出 | ||
宿主DNA残留检测分析 | AGE灰度分析不被检出 (GIS=0) | ||
qPCR检测分析 (≤5%) | |||
质粒超螺旋含量AGE分析 | 超螺旋程度高级别质粒≥90% | ||
TAL内毒素检测 | ≤0.01EU/μg | ||
≤ 0.005 EU/μg | |||
微生物限度 | 72小时无生长 | ||
全蛋白残留(NanoOrange) | ≤1% | ||
PH检测 | TE缓冲液:8.00±0.50 ddH2O:(5.00-7.00)±0.50 PBS:7.40±0.50 Tris:7.88±0.50 |
结果:基因敲入效率效率提升高达 30% (较之常规质粒)
结果:病毒滴度提升到高达 3倍 、ITR序列更稳定、规避抗性基因(较之常规质粒)
组别 |
病毒滴度 (IFU/ml) |
抗性基因 |
---|---|---|
pRRL-PGK-EGFP (常规质粒) |
1.23E+8 | 检出 (Ct value<30) |
pRRL-PGK-EGFP MF (GenCircle dsDNA) |
3.81E+8 | 未检出 (Ct≥35 ) |
组别 |
病毒滴度 (copies/ml) |
抗性基因 |
---|---|---|
CMV EGFP AAV2 (常规质粒) |
1.12E+12 | 2% |
CMV EGFP MF (GenCircle dsDNA) |
1.22E+12 | 未检出 |
结果:转录水平提升高达 4倍 ,减少免疫反应(较之常规质粒)
结果:蛋白表达水平提升高达 39% (较之常规质粒)
GenCircle dsDNA服务成功交付全球多个订单,涵盖不同长度的目的基因,包括多个难度项目。