实验方法：将通过GS-saRNA-1 (低免疫原性载体) 或GS-saRNA-2 (高免疫原性载体) 两种载体制备的eGFP saRNA (m5C修饰) 100ng，分别通过LNP和Lipofectamine MessengerMAX (Thermo Fisher) 转染HEK293细胞，24小时和48小时后通过荧光显微镜观察eGFP表达量。
实验结果：黄金城集团两种载体制备的eGFP saRNA均有显著的eGFP表达，LNP递送的组别表达量更高。
经筛选与验证的复制酶元件与修饰
整合固定元件的即用模板，加速交付
增强与延长的蛋白表达能力
更少量的mRNA即可实现更强更持久的蛋白表达
多种载体支持多元化应用
不同免疫原性的载体可选
| 线性mRNA | 自扩增RNA | 环状RNA | |||||
| 示意图 |  |
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| 结构 | 线性，开放5'和3'端，易被核酸外切酶降解 | 线性，开放5'和3'端，易被核酸外切酶降解 | 闭环结构，无开放的5'端和3'端 不易被核酸外切酶降解 |
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| 核糖体招募 | 5'Cap: 启动翻译，使mRNA更稳定 |
5'Cap: 启动翻译，使mRNA更稳定 |
核糖体进入位点 (IRES): 启动翻译 |
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| ORF |
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| UTR | 5'端和3'端的UTR结构提升mRNA的稳定性，促进mRNA翻译 | 5'端和3'端的UTR结构提升mRNA的稳定性，复制酶促进mRNA的自我复制 | 包含IRES+PIE+其他元件 | ||||
| PolyA尾 | 提升mRNA的稳定性，避免mRNA降解 | 提升mRNA的稳定性，避免mRNA降解 | 不需要 | ||||
| 蛋白表达量 | 强+++ | 强+++++ | 强++++ | ||||
| 蛋白表达半衰期 | 短 | 更长 | 长 | ||||
| 免疫原性 | 低 | 高 | 中等 | ||||
| 所需剂量 | 高 | 低 | 中等 | ||||
| 创新性 | 传统 | 新 | 更新 | ||||
| 服务名称 | 目标序列长度 | 交付量* | 纯化方式& | 载体# | 修饰 | 溶剂 | QC | saRNA 制备周期 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 自扩增RNA | 100bp - 6kb | 100μg至200mg | LiCl | GS-saRNA-1 GS-saRNA-2 |
m5C或不修饰 | Sodium citrate, pH6.5 (默认0.5-2mg/ml) |
研究级-标准 研究级-升级 |
快至2周 |
* 单批次交付量，总体交付量高达g级别
& 其他纯化方式欢迎请详询
# 不同载体匹配不同应用
| 载体名称 | 加帽类型 | 修饰类型 | 下游应用 |
|---|---|---|---|
| GS-saRNA-1 | Cap-AU | m5C或不修饰 | 要求免疫原性比较低的应用，例如：基因疗法等 |
| GS-saRNA-2 | Cap-AG | m5C或不修饰 | 要求免疫原性比较高的应用，例如：肿瘤/传染病疫苗等 |
| saRNA现货产品 | 修饰 | 规格 | 浓度 | 溶剂 | 周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| eGFP / F-Luc / mCherry saRNA | m5C | 50 / 100 / 200μg | 1 mg/ml | 1mM Sodium citrate, pH6.5 | 快至4天 |
| QC | 项目 | 检测方式 | 检测标准 | 研究级 - 标准 | 研究级 – 升级 |
|---|---|---|---|---|---|
| 鉴定 | 外观 | 视觉观测 | 澄清无异物 | ||
| RNA长度 | 毛细管电泳 (CE) | 目标长度±30% | |||
| RNA长度 | 琼脂糖凝胶电泳 | 检测到目标大小的条带 | |||
| Poly(A)长度 | 酶切法和CE | 目标长度±30% | |||
| RNA含量 | 紫外吸收 | 目标含量±5% | |||
| pH | pH计 | 目标值±0.5 | |||
| 缓冲液规格 | 按客户提供详情 | N/A | |||
| 纯度 | A260/280 | UV检测 | 1.70 ~ 2.30 | ||
| 加帽效率 | LC-MS | ≥ 90% | |||
| 纯度 | 毛细管电泳 (CE) | ≥ 70% | |||
| 杂质 | 内毒素 | 半定量 | < 10 EU/mg |
实验方法：将通过GS-saRNA-1 (低免疫原性载体) 或GS-saRNA-2 (高免疫原性载体) 两种载体制备的eGFP saRNA (m5C修饰) 100ng，分别通过LNP和Lipofectamine MessengerMAX (Thermo Fisher) 转染HEK293细胞，24小时和48小时后通过荧光显微镜观察eGFP表达量。
实验结果：黄金城集团两种载体制备的eGFP saRNA均有显著的eGFP表达，LNP递送的组别表达量更高。
实验方法：将表达eGFP的200ng线性mRNA，200ng环状RNA和100ng saRNA通过LNP转染HEK293T细胞。
实验结果：saRNA组的eGFP蛋白表达量更高。较之线性mRNA和环状RNA，saRNA仅需1/2的质量，或1/5的摩尔量即可达到更高的蛋白表达量。
实验结果：黄金城集团saRNA基于GS-saRNA-1载体合成，m5C修饰，具有不同的经过筛选验证的复制酶元件和修饰，与常规saRNA 比较，黄金城集团设计的GS-saRNA 具有更高的初始及持续蛋白表达量，表达量可以高达10倍。
实验结果：
