![grade-cas9-1](/catalog_imgs/subject/gmp-cas9-figure1.png?=2)
图1: 不同级别Cas9蛋白在原代T细胞的TRAC基因敲除实验的基因敲除效率分析。分别使用RUO级别和GMP级别的野生型和突变型Cas9蛋白,搭配黄金城集团合成的sgRNA ,通过电转方式对人原代T细胞进行TRAC基因敲除实验。该结果表明GMP级别的Cas9蛋白在T细胞的TRAC位点敲除实验中,与RUO级别Cas0蛋白产品拥有高度一致的基因敲除效率,敲除效率均为95%以上。随着开发项目逐渐向临床阶段推进,可以较快的从RUO级别Cas9蛋白产品转换到GMP级别Cas9蛋白产品。
本次实验体系:
参数 | 数值 |
Cas9蛋白用量 | ~4 μg |
Cas9: sgRNA (摩尔比) | 1:2 |
RNP投入量 | ~25 pmol |
细胞数 | 1.0 × 106 |
反应体积 | 20 μl |