通用问题

• 一般来说，一抗的推荐工作浓度是多少？

  蛋白质印迹测试：0.1-1 μg/ml
  IHC、ICC、FAC 和 IP 测试：1-5 μg/ml
  Elisa测试: 0.05-0.2 µg/ml

• 你们有主要为制药企业设计的抗体产品吗？

  有的，链接如下：

  THE™ cAMP Antibody, mAb, Mouse

  THE™ ADP Antibody, mAb, Mouse

  THE™ PEG Antibody, mAb, Mouse

  Protein A ELISA Kit
• WB实验背景高的原因是什么？
  • 一抗浓度可能过高
  • 封闭不充分
  • 一抗存在非特异性吸附
  • 上样样量过大
  • 二抗浓度可能过高
• Western blot中的蛋白条带与预测的蛋白分子量大小不同，可能的原因是什么?
  • 翻译后修饰，如磷酸化、糖基化等，所有这些都可能增加蛋白质的分子量。
  • 翻译后切割：用于蛋白质加工，即从前体切割成成熟活性形式，例如半胱天冬酶前体发生的情况。
  • 剪接变体：来自选择性剪接的异构体。
  • 相对带电氨基酸组成（带电氨基酸和不带电氨基酸的比率）。
• 当我用FACS分析细胞质蛋白检测时，结果是阴性的。 然而，通过 Western Blot 分析时结果为阳性，显示条带具有正确的分子量。可能的原因是什么？
  • 抗体工作浓度低。
  • 细胞膜未充分穿透。
  • 抗体孵育时间太短。
  • FACS检测激发波长与荧光标记抗体激发波长不一致。
• 一般来说，我应该如何保存抗体？

  请仔细阅读并遵循每种抗体产品说明手册上有关产品保存的内容。

  通常，短期保存抗体应在2-8℃保存，长期保存则应保存在-20℃。分装储存以避免反复冻融。

  以下抗体产品需要避光保存。

  THE™ HA Tag Antibody [iFluor 555], mAb, Mouse

  THE™ DYKDDDDK Tag Antibody [iFluor 647], mAb, Mouse

  THE™ V5 Tag Antibody [iFluor 488], mAb, Mouse

  THE™ His Tag Antibody [FITC], mAb, Mouse
• 你们如何保证抗体的质量？

  为了确保不同批次之间的抗体质量，黄金城集团有严格的QA 放行，会比较不同批次之间的灵敏度和特异性。

• 我应该使用单克隆抗体还是多克隆抗体？

  多克隆抗体

  多克隆抗体与单克隆抗体相比，多克隆抗体开发相对较快且成本低廉。它们是非特异性的，因为它们能够识别抗原上的多个表位。

  优点

  由于抗体将结合多个表位，因此可以帮助增强WB信号。

  由于可识别多个表位，多克隆抗体可以在IP/ChIP检测中显示更好的结果。

  更能容忍抗原的微小变化，例如多态性、糖基化异质性或轻微变性。当抗原的性质未知时有优势。

  开发成本低廉，工期短。

  缺点

  更容易出现批次之间的差异。

  多个表位使得可能存在潜在的交叉反应。

  单克隆抗体

  优点

  与多克隆抗体相比，单克隆抗体的均一性很高。

  如果保持实验条件不变，单克隆抗体的结果在实验间可重复性高。

  当生产程序必须标准化，如临床试验和治疗时，所有批次都将是一致的，针对同一个抗原表位，这是一个特别的优势。

  单克隆抗体的高特异性降低了背景和交叉反应，有助于提供可重复的结果，并确保亲和纯化的效率。

  特定性质的抗体可以被识别和选择，例如灵敏度要求和交叉反应性水平可以被指定和筛选，以确定具有所需特性的细胞系。

  杂交瘤提供了一种永生细胞系，能够产生无限数量的高特异性抗体。

  缺点

  抗体可能过于特异（例如，在多物种中检测到的可能性较小）。

  通过化学方法处理抗原比多克隆抗体更容易受到表位丢失的影响。这可以通过将两种或两种以上的单克隆抗体混合来抵消。

  对于杂交瘤来说，生产费用昂贵，而且时间周期较长。

表位标签抗体和The™ Elite抗体

• 使用更亮的荧光基团可以更好地检测低丰度细胞上的分子吗?

  荧光基团的亮度和抗体的灵敏度是影响检测灵敏度的两个因素。The™Elite系列抗体在市场上的灵敏度是最好的。荧光团越亮，整体检测效果越好。GenScript公司的iFluor抗体是THE™Elite抗体系列偶联了荧光化合物。与传统的荧光染料相比，iFluor系列更明亮，稳定性更好。

• 在流式检测中，推荐使用哪个抗体来检测极少量的His蛋白?

  GenScript有四种荧光基团偶联的His标签抗体用于FACS分析，包括A01620（FITC），A01800（iFluor488），A01801（iFluor555）和A01802（iFluor647）。iFluor系列因其比FITC结合抗体具有更高的灵敏度而被推荐用于FACS分析。以下是GenScript的iFluor抗体的波长范围：

  Cat. No.	Conjugate	Ex (nm)	Em (nm)
  A01800	iFluor 488	491	514
  A01801	iFluor 555	559	569
  A01802	iFluor 647	654	674

  根据黄金城集团的FACS分析结果，A01802（THE™ His Tag Antibody [iFluor 647], mAb, Mouse）的灵敏度略高于A01800（THE™ His Tag Antibody [iFluor 488], mAb, Mouse）。如果His Tag信号较低，建议使用A01802。

• 对于A00186（THE™His Tag Antibody, mAb, Mouse），免疫荧光的工作浓度范围是什么？

  对于A00186，建议起始浓度为1 µg/ml。

• 黄金城集团正在使用你的ELISA试剂盒L00436（His Tag ELISA Detection Kit）和黄金城集团喜欢使用同样的抗His单克隆抗体进行western blot。L00436 ELISA试剂盒所用his抗体的货号是哪个?WB的推荐浓度是多少？

  L00436 ELISA试剂盒中抗His 抗体的货号为A00186。WB推荐使用浓度为0.1~0.2 µg/ml。

• 我需要一种兔抗的His标签抗体，希望它可以识别融合蛋白内部的His标签。我想用这个抗体进行流式细胞术。我应该使用哪种抗体？

  货号A00174产品是兔抗His标签抗体。它已被测试用于内部His标签的识别，但不能用于流式细胞术。

  对于流式细胞术，推荐使用以下抗体。它们都能识别融合在蛋白质内部的His标签。

  • A01620 THE™ His Tag Antibody [FITC], mAb, Mouse
  • A01800 THE™ His Tag Antibody [iFluor 488], mAb, Mouse
  • A01802 THE™ His Tag Antibody [iFluor 647], mAb, Mouse
• 关于A01795（The™ PEG Antibody, mAb, Mouse）的问题

  • A01795（The™ PEG Antibody, mAb, Mouse）能否识别PEG5？

    黄金城集团尚未对PEG5进行测试。黄金城集团对PEG12进行了检测，结果呈阳性。黄金城集团的一位客户对PEG2进行了测试，并观察到了良好的结果。

  • 能否将A01795（The™ PEG Antibody, mAb, Mouse）用于亲和柱？

    在大多数情况下，将抗体（IgG/IgM/IgY）与琼脂糖树脂结合是可以的。黄金城集团的PEG抗体可以用于这种偶联。

  • 您是否有关于复溶后抗体稳定性的信息？我担心的是，IgM抗体可能在冻干过程中发生了片段化，或者在复溶过程中发生了聚集。

    如产品手册所述，THE™ PEG Antibody, mAb, mouse使用前应以冻干形式保存。冻干形式在-20°C或更低温度下可稳定保存。重组抗体在2~8°C可保存2~3周，在-20°C及以下可保存12个月。请避免反复冻融循环。

    用去离子水（或同等物质）复溶冻干产品，使抗体浓度达到0.5 mg/ml。对于长期储存，建议在复溶的抗体溶液中添加甘油至终浓度为50%（v/v）。

• 我购买了A01428-100（THE™ DYKDDDDK Tag抗体[HRP], mAb, Mouse）。我想知道HRP的存在是否会干扰二抗（山羊抗小鼠二抗或Protein G二抗）的结合？

  在使用[HRP]标记的一抗时，有一些变量可能会影响它与二抗的结合。

  • HRP造成的立体阻碍
  • 抗体的结合位点可能被HRP占据。因此，黄金城集团建议使用非偶联抗体A00187 THE™ DYKDDDDK Tag Antibody, mAb, mouse.

二抗常见问题目录号

• A00166（Goat Anti-Human IgG Antibody (H&L) [HRP], pAb）是否特异识别人IgG？它与非人灵长类动物或啮齿类动物有交叉反应吗？

  A00166（Goat Anti-Human IgG Antibody (H&L) [HRP], pAb）可识别人IgG，但尚未检测与其他物种的交叉反应。

• A00160（Goat Anti-Mouse IgG Antibody (H&L) [HRP], pAb）会与兔发生交叉反应吗？

  尚未检测A00160（ Goat Anti-Mouse IgG Antibody (H&L) [HRP], pAb）与兔子的交叉反应。

一抗常见问题抗体

• A01622（GAPDH Antibody, mAb, Mouse）能识别哪些物种的GAPDH？

  A01622的免疫原是来自红细胞的人GAPDH蛋白。A01622可检测人、猪、牛、羊和鱼GAPDH的内源性水平。本产品尚未针对其他物种进行检测。A00191（GAPDH Antibody, pAb, Goat）可与人、小鼠、大鼠、山羊、兔、鸡、仓鼠、牛、猪、鱼和大肠杆菌的细胞和组织裂解液中的GAPDH发生特异性反应。

• 关于A01090 PIN1兔抗的问题

  • 目的蛋白的分子量约为18 kDa，为什么WB检测图片中的条带接近60 kDa。

    测试的目标蛋白是57 KDa，因为它是重组蛋白，而不是分子量为18 KDa的天然蛋白。

  • 融合伴侣是什么？

    从COA文件中可以看到，该蛋白的融合伴侣是calbindin、Trx标签和Strip-Ⅱtag。

  • 融合伴侣与PIN1之间是否存在交叉反应？

    根据多序列比对结果，该重组蛋白中只有一个序列与用于免疫的多肽抗原相同。根据这些结果，融合伙伴与PIN1之间应该没有交叉反应。

  • PIN1与其伴侣是如何融合的？

    PIN1在N端与其伴侣融合。