![Sanger测序的典型报告](/gsimgs/subject/hybridoma-antibody-sequencing-case1-1.jpg)
![Sanger测序的典型报告](/gsimgs/subject/hybridoma-antibody-sequencing-case1-2.jpg)
细胞(杂交瘤细胞、B细胞、单个B细胞)
服务包 | 交付周期 Updated (从开始) |
默认交付 | 可选交付 | |
---|---|---|---|---|
Sanger测序 | 抗体可变区 | 10个工作日 |
测序报告包括:
|
|
全长抗体 | 12个工作日 | |||
NGS测序 | 高通量测序 | 10个工作日 |
|
|
注:
a) 样品要求:
数量:>1×106个细胞; 物种: 人,小鼠,大鼠,兔,雪貂等。
b) 附加服务:1. 高通量重组抗体表达服务 2. 大规模抗体生产服务 3. 抗原抗体结合确认。
目标:开发4-1BB特异性抗体
免疫:4-1BB胞外区
结果:获得了107株4-1BB抗体,并使用高通量NGS抗体测序平台分析了基因组信息
1. 系统进化树分析-VH区
在 107 个克隆中,有 5 个克隆显示出与其他克隆相同的V区。
2. 系统进化树分析-VL区
在107个克隆抗体中,有6个克隆与其他克隆显示相同的V区。
3. Germline分析(表明抗体多样性)
4. CDR长度分析(表明候选抗体)
1. 保存抗体多样性: 杂交瘤测序直接对杂交瘤细胞产生的抗体进行测序,这保留了抗体的多样性。相反,从头抗体测序依赖于分离单个抗体,并且可能无法捕获免疫应答中存在的全部多样性。
2.时间和成本效率: 与从头抗体测序相比,杂交瘤细胞测序是一种更具时间和成本效益的方法。
3. 质量控制和确认: 由于序列是从杂交瘤细胞本身获得,因此可以确保该抗体确实是由杂交瘤细胞产生。在从头测序中,需要额外的验证步骤来确认获得序列的真实性。
4. 与已确定的杂交瘤系的相容性: 杂交瘤细胞系具有明确的追溯历史,已知的特性和可追溯的文件,为抗体测序提供大量的信息,有助于进一步表征和开发。
5. 区分某些氨基酸: 蛋白质测序在区分特定氨基酸(如亮氨酸和异亮氨酸)时会遇到挑战,这可能导致在最终序列中引入错误。相反,杂交瘤测序直接对抗体产生细胞的cDNA进行测序,消除了潜在问题,并产生更精确、准确和可靠的结果。
1. 研究目标:如果您需要测定抗体的完整编码序列(其中包括可变区和恒定区),可使用Sanger测序法。然而,如果您需要对抗体库进行全面分析,包括克隆多样性和罕见或低丰度变异体的鉴别,NGS可以提供更全面的描述。
2.样品数量:评估需要测序的样品数量。Sanger测序法繁琐且成本较高,适用于少量样品。另一方面,NGS测序平台提供更高的通量,使得能够同时对大量样品进行测序。
3. 成本考虑:评估您的预算和资源。通常使用Sanger测序法,对小规模项目或对有限数量的样品进行测序时更具成本效益。由于文库准备、测序和数据分析相关的前期成本较高,NGS可能更昂贵。但是,对于大规模项目或测序样品较多时,NGS更具成本优势。
4. 序列准确度: 评估您的研究所需序列准确度水平。Sanger测序法长期以来以准确度高而闻名,特别是在获得单个完整序列方面。NGS平台的测序一般是准确的,但具有较高的误差率,特别是在同聚物区域或重复序列方面。您需要考虑两种方法中哪一种可以满足项目的特定准确度要求。
黄金城集团的客服代表将在周一至周五为您提供全天24小时的支持与协助。您可以随时联系黄金城集团寻求帮助。您可通过在线、电话、电子邮件或传真下单。请保存好您的付款信息(信用卡、采购订单或银行信息)。