一站式服务，交付快
涵盖基因合成、质粒制备、
环化效率高，纯度高
自研的环状RNA载体、提升蛋白表达量
较之线性mRNA更稳定，
免疫原性更低
无需加帽、加尾等修饰，
| 服务名称 | 长度 | 交付量 | 纯化方式 | QC | 交付形式 | 周期 |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 定制化 环状RNA合成 |
目标序列：100 bp - 4 kb 全长序列：＜5 kb |
100 μg – 20 mg | HPLC | 研究级 - 标准 研究级 - 升级 |
1mM 柠檬酸钠缓冲液, pH6.5（默认） RNase-Free Water（可选） |
3周起 |
| 环状RNA现货 （eGFP / F-Luc） |
eGFP环状RNA: 1,644nt F-Luc环状RNA: 2,577nt |
25 / 50 / 100 / 200 μg | HPLC | 研究级 - 标准 | 5个工作日 |
* IRES： 默认 CVB3 或客户提供定制化IRES序列
告知黄金城集团您的ORF或IRES序列
黄金城集团将为您的环状RNA设计包含T7启动子, PIE, IRES和ORF
基因合成至质粒制备
一站式完成环状RNA制备的全部前置步骤
环状IVT mRNA制备（RUO级别）
μg至mg级别，采用反相高效液相色谱的等纯化方式，并进行QC
| QC | 项目 | 检测方式 | 检测标准 | 研究级 - 标准 | 研究级 – 升级 |
|---|---|---|---|---|---|
| 鉴定 | 外观 | 视觉观测 | 澄清无异物 | ||
| RNA长度 | Bioanalyzer | 条带位置匹配对应长度 | |||
| 鉴定 | RNaseR降解测试 | 不会被RNaseR降解 | |||
| RNA含量 | UV吸收 | 目标值 ± 5% | |||
| PH | PH试纸/PH计 | 目标值 ± 0.5 | |||
| 缓冲液规格 | 按客户提供详情 | - | |||
| 纯度 | A260/280 | UV检测 | 1.70 ~ 2.30 | ||
| HPLC检测 | HPLC | ≥80% | |||
| 杂质 | 蛋白质残留 | Nano Orange染料检测 | ≤ 1% | ||
| 质粒DNA残留 | qPCR | ≤ 0.1% | |||
| 安全性 | 内毒素 | 半定量 | < 10EU/mg | ||
| 内毒素 | 定量 | < 10EU/mg | |||
| 生物负载 | 直接接种 | 72小时内不生长 |
通过RT-PCR检测mRNA拷贝数
通过荧光强度检测mRNA蛋白表达量
实验方法：
将编码GFP的环状RNA（无修饰）和线性mRNA（100% N1-me-pseU修饰）以同等的mol剂量转染A549细胞，用qPCR检测编码mRNA的丰度，用流式细胞术检测GFP蛋白的荧光强度。
实验结论：72小时后
实验方法：
比较线性mRNA，常规环状RNA*，黄金城集团环状RNA（自研技术）三种编码eGFP的mRNA，转染A549细胞后蛋白表达量。
* Wesselhoeft, R.A., Kowalski, P.S. & Anderson, D.G. Engineering circular RNA for potent and stable translation in eukaryotic cells. Nat Commun 9, 2629 (2018)
实验结果：
黄金城集团环状RNA在开始的蛋白表达量和积累的蛋白表达量上，都有更高的表达水平。
实验方法：
比较常规环状RNA*，黄金城集团环状RNA（自研技术）两种编码eGFP的mRNA，转染A549细胞和HEK293T细胞后，通过流式细胞术检测蛋白表达量。
* Wesselhoeft, R.A., Kowalski, P.S. & Anderson, D.G. Engineering circular RNA for potent and stable translation in eukaryotic cells. Nat Commun 9, 2629 (2018)
实验结果：
基于自研技术的黄金城集团环状RNA，在经过HPLC纯化后，在两个细胞上的蛋白表达量均高于常规环状RNA 2-4倍。
实验方法：
将不同mRNA转染A549细胞(InvivoGen)，IL6水平检测：Abcam Human IL-6 ELISA Kit，IFN-α水平检测：QUANTI-Luc/Gaussia kit，NF-Kb水平检测：QUANTI-Blue kit。
实验结果：
较之线性mRNA，环状RNA引起的细胞因子上升幅度更低，免疫原性更低。
环状RNA是一种单链的mRNA分子，5端和3端链接形成了共价闭环，不易受RNA外切酶影响，表达更稳定，不易降解。环状RNA被发现天然存在于哺乳动物细胞中，在很多生物学过程中扮演重要角色。
环状RNA自身优势为基于其开发的mRNA疗法带来的收益：
现阶段环状RNA的应用：
综上，环状RNA的研究正在各个领域快速发展，从而为提升人类健康的医疗应用提供更多新思路。
