客户感言

Shawn Yang

Prime Medicine

I have been using GenScript to order customized critical reagents for an important assay. GenScript can always deliver materials efficiently with good quality. Their technical support is great to address any additional questions.

服务优势

长达231 nt！支持脱盐和HPLC级别

分子量精准，纯度高
批次间一致性好

经验证！基因编辑效率高

编辑效率可超过60%
默认修饰提升编辑效率

一站式解决方案

提供PE2/PE3 mRNA
提供经实验验证的操作指南

RUO至GMP级别的产品

全程支持您的项目从研发阶段
走向临床研究和IND申报

服务详情

* pegRNA任意位置添加任意数量的常规2'-甲氧基，硫代修饰不额外收费，其他可提供200种+定制化修饰，请详询。
# 200 nt内纯度可以保证≥85%，200 nt以上请详询。

案例分享

• 218 nt pegRNA：脱盐与HPLC纯化级别，分子量精准、纯度高

  HPLC纯化的pegRNA (218nt)：分子量精准

  

  脱盐纯化的pegRNA (218nt)：分子量精准

  

  HPLC纯化的pegRNA (218nt)：纯度高达 92.78%

  
• 添加3'tevopreQ1 motif修饰，218 nt pegRNA编辑效率提升至43.4%
  

  

  实验方法: HEK293T cells (0.2 x 10⁶个细胞) ，电转1μg PE2/PE3 mRNA, 30pmol nicking sgRNA和90pmo不同长度的pegRNA (HPLC纯化) ，靶向HEK3位点。3天后提取基因组DNA，通过Sanger测序检测基因编辑效率。

  实验结果： 添加 3'tevopreQ1 motif的pegRNA编辑效率可高达43.4%，远高于不加该结构的pegRNA。

  备注：218nt pegRNA是181nt pegRNA添加37nt tevopreQ1 motif 组成，据报道tevopreQ1 motif 可以帮助pegRNA的3'端不被核酸外切酶降解。 ().

• 141 nt pegRNA：编辑效率高达63.5%
  

  HPLC纯化pegRNA (141nt) : 分子量精准

  

  HPLC纯化pegRNA (141nt) : 纯度高

  

  实验方法: HEK293T cells (0.2 x 10⁶个细胞) ，采用电转方式，以3：1的比例加入脱盐或HPLC纯化的pegRNA (141nt) 和nicking sgRNA，同时加入0.15 μg，0.25 μg，0.375 μg，0.5 μg，0.75 μg，1.0 μg的PE2/PE3 mRNA，靶向HEK3位点，敲除5bp碱基。3天后提取基因组DNA，通过Sanger测序检测基因编辑效率。

  实验结果： HPLC 纯化pegRNA编辑效率高达63.5%，脱盐pegRNA编辑效率高达52.5%，编辑效率呈剂量依赖增长。

• 脱盐与HPLC纯化级别的pegRNA细胞毒性低
  

  实验方法: HEK293T 细胞 (0.2 x 10⁶个细胞) ，以3：1的比例加入脱盐或HPLC纯化的pegRNA (141nt) 和nicking sgRNA，同时分别加入0.5μg、0.75μg、1.0μg的PE2/PE3 mRNA，靶向HEK3位点。3天后，检测细胞毒性，相对细胞活性% = pegRNA加样组细胞数量 / 空白组细胞数量。

  实验结果: 脱盐或HPLC纯化的pegRNA在45 pmol，67.5 pmol，90 pmol的浓度下对HEK293T细胞无明显细胞毒性。

技术资源

Prime Editing 基因编辑操作指南 - HEK293T细胞
( Thermo Fisher Neon™转染平台 ) Prime Editing 基因编辑操作指南 - HEK293T细胞
( Thermo Fisher Neon™转染平台 )

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