![](/catalog_imgs/subject/p24-img01.png)
图1:检测原理
产品编号 | 名称 | 数量 | 价格 | 操作 |
---|---|---|---|---|
L00938
|
Lentivirus Titer p24 ELISA Kit |
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¥4980.00 96 Tests |
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L00974
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Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro |
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¥5480.00 96 Tests |
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L01019
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Lentivirus Titer p24 Kit Easy |
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¥2590.00 96 Tests |
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图1:检测原理
图2:检测流程图
Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro对游离p24的去干扰能力
图3:有效减少游离p24的干扰
将不同浓度的p24蛋白添加稀释液中,结果显示,Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro (GenScript, L00974) 基本不会检测到添加到稀释液中的游离p24蛋白。
图4:特异性检测慢病毒颗粒上的p24蛋白
将不同浓度的p24蛋白添加到纯化的慢病毒样本中,结果显示,Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro (GenScript, L00974),检测到的p24蛋白浓度与实际慢病毒颗粒上p24浓度一致。
回收率用于确定分析物检测是否受样品基质差异的影响,通过将已知量的分析物加标到不同的样品基质中来验证回收率。以下是根据具有代表性的准确度验证生成的报告和数据示例,在这项验证中,使用3批次试剂盒(GenScript, L00938),将已知量的分析物加标到基质中混合验证回收率,样本重复测量3次。
Table 1: 三批次试剂盒回收率测试结果为 86%-108%
批次编号 | 重复次数 | 平均测值(pg/mL) | 回收率 |
---|---|---|---|
#1 | 3 | 1945.30 | 86% |
#2 | 3 | 1787.64 | 108% |
#3 | 3 | 1752.76 | 90% |
A. 批内精密度/重复性
批内精密度验证体现测定板内每孔之间的重复性,有助于确保在测定板的不同孔中运行样本检测可以给出可靠的结果。 以下是根据具有代表性的批内精密度验证生成的报告和数据示例,在这项验证中,使用黄金城集团p24检测试剂盒(GenScript, L00938),分别对低、中、高3个浓度水平的样本进行测试,每个样本各重复检测10次,每个样本计算10次测量浓度结果的变异系数(CV)。
Table 2: 三批次试剂盒批内精密度验证结果
批次编号 | 重复次数 | 平均测值(pg/mL) | %CV |
---|---|---|---|
#1 | 10 | 215.55 | 3% |
#1 | 10 | 829.45 | 4% |
#1 | 10 | 1537.42 | 4% |
#2 | 10 | 209.60 | 5% |
#2 | 10 | 792.76 | 2% |
#2 | 10 | 1431.42 | 3% |
#3 | 10 | 188.09 | 6% |
#3 | 10 | 759.99 | 4% |
#3 | 10 | 1377.71 | 3% |
B. 批间精密度
批间精密度体现同一样品在多批测定间的重现性,有助于确保在不同批次试剂盒中运行样本检测可以给出可靠的结果。 以下是根据具有代表性的批间精密度验证生成的报告和数据示例,在这项验证中,使用3个不同批次试剂盒(GenScript, L00938),分别对低、中、高3个浓度水平的样本进行测试,每个样本各重复检测10次,每个样本计算30次测量浓度结果的变异系数(CV)。
Table 3: 三批次试剂盒批间差验证结果
批次数量 | 重复次数 | 平均测值 pg/mL | %CV |
---|---|---|---|
3 | 3×10 | 204.41 | 7% |
3 | 3×10 | 794.07 | 5% |
3 | 3×10 | 1448.85 | 6% |
使用慢病毒滴度p24试剂盒对慢病毒纯化生产全流程进行慢病毒滴度监测,有利于慢病毒纯化和成产过程控制和优化。黄金城集团慢病毒滴度p24试剂盒(GenScript, L00938)的超宽线性可以有效减小稀释倍数,从而节约检测时间以及减少稀释过程导致的偏差。
Table 4a: 黄金城集团慢病毒滴度p24试剂盒在慢病毒纯化生产全流程的滴度检测
样品名称 | 样品OD值 | 样品检测值 (pg/mL) | 稀释倍数 | p24浓度 (LP/mL) | CV % |
---|---|---|---|---|---|
HM上清液 | 3.151 | 2445.918 | 100 | 超出检测范围,无效 | / |
1.225 | 444.343 | 3000 | 1.67E+10 | ||
PB核酸酶孵育 | 3.12 | 2369.055 | 100 | 超出检测范围,无效 | / |
1.242 | 451.997 | 3000 | 1.69E+10 | ||
Centrifugation离心 | 3.103 | 2328.92 | 100 | 超出检测范围,无效 | / |
0.94 | 321.172 | 3000 | 1.20E+10 | ||
CF-01澄清过滤 | 3.136 | 2405.64 | 100 | 超出检测范围,无效 | / |
0.926 | 315.765 | 3000 | 1.18E+10 | ||
UF/DF浓缩换液 | 2.183 | 1040.264 | 3000 | 3.90E+10 | 3 |
0.152 | 36.234 | 90000 | 4.08E+10 | ||
CF-02澄清过滤 | 1.994 | 890.168 | 3000 | 3.34E+10 | 6 |
0.142 | 32.441 | 90000 | 3.65E+10 | ||
GF凝胶过滤 | 1.496 | 578.496 | 3000 | 2.17E+10 | / |
0.106 | 18.902 | 90000 | 超出检测范围,无效 | ||
UF/DF-02浓缩换液 | 2.623 | 1501.37 | 3000 | 5.63E+10 | 3 |
0.185 | 47.906 | 90000 | 5.39E+10 | ||
最终样 | 3.155 | 2459.286 | 3000 | 超出检测范围,无效 | / |
0.799 | 265.916 | 90000 | 2.99E+11 |
Table 4b: 竞品慢病毒滴度p24试剂盒在慢病毒纯化生产全流程的滴度检测
样品名称 | 样品OD值 | 样品检测值 (pg/mL) | 稀释倍数 | p24浓度 (LP/mL) | CV % |
---|---|---|---|---|---|
HM上清液 | 1.223 | 86.687 | 12000 | 1.30E+10 | / |
3.143 | 291.899 | 2000 | 超出检测范围,无效 | ||
PB核酸酶孵育 | 1.375 | 100.254 | 12000 | 1.50E+10 | / |
3.073 | 282.872 | 2000 | 超出检测范围,无效 | ||
Centrifugation离心 | 1.073 | 73.79 | 12000 | 1.11E+10 | / |
3.019 | 275.974 | 2000 | 超出检测范围,无效 | ||
CF-01澄清过滤 | 1.028 | 69.953 | 12000 | 1.05E+10 | / |
3.051 | 279.996 | 2000 | 超出检测范围,无效 | ||
UF/DF浓缩换液 | 2.675 | 234.108 | 10000 | 超出检测范围,无效 | / |
0.653 | 39.453 | 60000 | 2.96E+10 | ||
CF-02澄清过滤 | 2.484 | 212.127 | 10000 | 超出检测范围,无效 | / |
0.612 | 36.317 | 60000 | 2.72E+10 | ||
GF凝胶过滤 | 2.048 | 165.17 | 10000 | 2.06E+10 | 5 |
0.522 | 29.342 | 60000 | 2.20E+10 | ||
UF/DF-02浓缩换液 | 3.011 | 275.001 | 10000 | 超出检测范围,无效 | / |
1.021 | 69.346 | 60000 | 5.20E+10 | ||
最终样 | 0.64 | 38.46 | 480000 | 2.31E+11 | / |
2.765 | 244.786 | 80000 | 超出检测范围,无效 |
* 红色标记数据为超出检测范围数据
在慢病毒纯化生产的工艺开发过程中,9个工艺过程的18个样品被采集并进行滴度检测。实验结果发现: 1. 黄金城集团慢病毒滴度p24检测试剂盒的稀释倍数低于用竞品的p24检测试剂盒的稀释倍数。 2. 在稀释慢病毒到慢病毒滴度p24检测试剂盒的线性范围的过程中,18个样品使用黄金城集团慢病毒滴度p24检测试剂盒一次稀释成功率为 67%,而使用竞品p24检测试剂盒一次稀释成功率为 56%。
病毒滴度有两种表示方式:以转导测量的功能(传染性)滴度或以病毒颗粒测量的物理滴度。物理滴度是测量样本中存在多少病毒,通常根据蛋白质(例如p24)的水平计算。功能滴度是衡量有多少病毒可以感染细胞的指标,通常比物理滴度低 100-1000 倍。
对于Lentivirus Titer p24 ELISA Kit (GenScript, L00938),可以使用试剂盒中稀释后的1× Wash Solution进行样本稀释,效果是相同的。 对于Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro (GenScript, L00974),在分离游离p24阶段,可以不对慢病毒上清样本进行稀释;若稀释,则使用Cell culture medium(10% FBS);在后续的ELISA检测阶段,可以使用试剂盒中稀释后的1× Wash Solution稀释。如果使用样本或制剂buffer作为标准品和样品的稀释液,需要通过预实验测试回收率是否符合预期,符合预期则可以使用,否则不建议使用。其他稀释液例如超纯水,未添加FBS的DMEM等都不能保证正常输出结果。如果您需要验证方面的支持,可以联系黄金城集团。 对于Lentivirus Titer p24 Kit Easy (GenScript, L01019),推荐使用 Assay Dilution Buffer(GenScript, B00062)。自行配制推荐配方为 1×PBS,10% FBS,1‰ Tween 20。
Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro 仅会检测出慢病毒衣壳中的p24蛋白,不会检测出游离的p24蛋白,通过ELISA方法测定,全程耗时约3 h。
Lentivirus Titer p24 ELISA Kit 检测的是总p24蛋白,包括游离的p24蛋白和慢病毒衣壳中的p24蛋白,通过ELISA方法测定,全程耗时约2.5 h。
Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Easy 检测的是总p24蛋白,通过化学放光法进行测定,孵育时间为15分钟,检测过程无需洗涤,全程耗时约30分钟。
均不含有人源材料,生物风险低。
Lentivirus Titer p24 ELISA Kit (GenScript, L00938),Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro (GenScript, L00974) 试剂盒中各配有一块预包被的96孔酶标板,其中包含8 孔 x 12 板条,黄金城集团建议按照说明书中推荐的标准曲线稀释梯度,配置8个标准品工作液。 为了确保滴度的可靠定量,建议标准品和样品均一式两份进行重复测试。由此可计算出一个试剂盒可以测试40个样本。
Lentivirus Titer p24 Kit Easy (GenScript, L01019) 所提供的试剂可按照说明书建议的工作体积进行96次测定。如果使用384孔板进行测定,所用试剂体积可进行等比例减少,但需要进行预实验确定测定的可靠性。
本品不固定检测板型号,客户可自行选择合适的检测板,以下为选择指南:
无效。需要调整稀释倍数重新复测。
慢病毒滴度p24检测试剂盒均为25℃反应,不会出现边缘效应。
可单独选购 20× Wash Solution (GenScript, B00063),该洗液适用于 Lentivirus Titer p24 ELISA Kit (GenScript, L00938),Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro (GenScript, L00974) 。
Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Pro, Lentivirus Titer p24 ELISA Kit 需使用能测定 450 nm 吸光度的酶标仪。酶标仪通过检测酶标板中液体的吸光值,读取OD值后进行定性或定量分析。
Lentivirus Titer p24 ELISA Kit Easy 需使用能进行化学发光检测的微孔板读数仪/读板机/酶标仪/分析仪。化学发光分析仪通过光电倍增管将化学发光反应(酶促发光或直接发光)产生的光信号转换为相应的信号值,用RLU(相对光单位)表示,以达到定量或定性的检测目的。
参考文献
产品编号 | 名称 | 数量 | 价格 | 操作 |
---|---|---|---|---|
B00062
|
Assay Dilution Buffer |
|
¥651.00 60 mL |
|
B00063
|
20× Wash Solution |
|
¥498.00 60 mL |
|
D00042
|
96-well Low Binding White Microplates & Sealers |
|
¥698.00 5 plates |
|
L00350
|
ToxinSensor™ Chromogenic LAL Endotoxin Assay Kit |
|
¥800.00
|
|
L00351
|
ToxinSensor™ Gel Clot Endotoxin Assay Kit |
|
¥1250.00 1 Kit |
|
L00886
|
Benz-Neburase™ Nuclease ELISA Kit |
|
¥7200.00 96 Test |
|
L00942
|
AAV2 Titer Capsid ELISA Kit |
|
¥4980.00 96 Tests |
|
L00976
|
BSA ELISA Kit, 2G |
|
¥4980.00 96 Tests |
|
Z03695
|
Benz-Neburase™, tag-free |
|
¥392.00
|
|
Z03708
|
Benz-Neburase™ GMP, tag free |
|
¥2100.00
|
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